有如此辉煌历史的青霉素，享受官方的独特“宠爱”，为它特制相应的使用法规条例。青霉素无论给药途径、患者性别年龄，使用前必须做皮试。这在所有抗生素中，独一份。事实也是如此，纵然拥有伟大的贡献，使用时也要小心谨慎。在以往的使用过程中，由青霉素导致的损害事件层出不穷。青霉素易诱发过敏反应，发生率居药物之首，主要症状为皮肤红肿瘙痒，咽喉水肿，严重的会发生过敏性休克。所以使用青霉素必须遵循三项核心原则：询问病史‌，全面了解患者的身体状况及药物过敏史，尤其青霉素过敏史；观察体表‌，检查患者局部皮肤，确保皮肤完整、无炎症、红肿或血管异常；告知理由‌，告知患者操作目的、可能出现的副作用，强调注射后需观察20分钟。同时规定：超过72小时，必须重新做皮试。

“挖墙破壁”是青霉素杀菌的制胜法宝，青霉素是通过破坏细菌细胞壁的合成来发挥灭菌作用。青霉素属于β-内酰胺类抗生素，其分子结构能够与细菌体内的青霉素结合蛋白结合。这种结合会破坏细胞壁粘肽的正常合成，导致细菌细胞壁无法维持正常形态。当细菌细胞壁受损后，受内外渗透压的影响，大量水分会进入细菌体内，造成细菌肿胀、破裂、溶解，从而达到杀菌的作用。打个比方，细菌生活在水里，青霉素把细菌的外墙捣了个窟窿，大水倒灌，细菌被灭了。而人类细胞只有细胞膜没有细胞壁，所以青霉素对人类的毒性相对较小。

青霉素的β-内酰胺环，在酸碱性环境或者高温条件下不稳定，极易开环，失去灭菌效果。所以日常需避光、低温、干燥保存，现配现用。静脉滴注时需控制溶媒的pH和温度。首选溶媒0.9%氯化钠注射液（生理盐水），青霉素在生理盐水中常温下可稳定4—6小时。配伍上避免与氨基糖苷类同瓶滴注（可发生沉淀反应）；与维生素C等酸性药物配伍会导致降低效价。

青霉素主要用于治疗敏感菌引起的细菌感染，尤其对革兰氏阳性菌（如链球菌、肺炎球菌）及部分革兰氏阴性菌、螺旋体等有效。随着现代科技的进步，出现了很多合成的抗生素，菌谱宽广，作用的靶点也越来越多，还有和酶抑制剂联合使用增强治疗效果，治疗感染有了更多选择。但是青霉素高效低毒，针对性强，至今仍是全球最常用的抗生素之一，是梅毒、链球菌感染的首选抗感染药。